實驗室酶標儀專題解說
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酶標儀是一個很神奇的儀器,任何病毒或者是添加劑都無法逃出它的檢測,下面我們將為您詳細介紹酶標儀及酶標儀的使用問題。
酶標儀即酶聯免疫檢測儀,是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器,可簡單的分為半自動和全自動2大類,酶標儀不僅應在醫療行業用于酶聯免疫學的檢測工作,而且在食品衛生,農業,畜牧等產業有著廣泛的應用。
1.酶標儀在醫療行業的檢測項目
過敏原,皮膚不耐受等
甲狀腺:促甲狀腺激素,T3T4等
糖尿病:C肽,胰島素,胰島素抗體,胰島素原等
優生優育:弓形蟲抗體,巨細胞病毒,風疹病毒等
不孕癥:性激素六項,泌乳素,雌三醇,生長素,抗精子抗體等
傳染病類:例如肝炎,艾滋病,衣原體,肺炎支原體,梅毒,水痘等
腫瘤標志物:癌胚抗原,甲胎蛋白,乳腺癌,卵巢癌,膀胱癌,胃腸癌等
2.酶標儀在食品衛生,農業以及畜牧行業的檢測項目
1.營養成分
2.添加劑
3.農藥殘留量
4.菌毒素
5.無機毒素
6.抗生素激素殘留
7.致癌物質殘留
8.有毒有害物質污染等
另外酶標儀還可檢測曾使人們深受其害的瘦肉精,檢測結果很[accuracy]。
1.光吸收酶標儀:是用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測,特定波長的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關系,由此可以用來定性和定量的檢測,光吸收的檢測技術成熟,成本低,操作簡單,但是動態范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強,一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源,而紫外/可見酶標儀是可以將兩種光源進行切換,適應不同測量波長的需求。
2.熒光酶標儀:是用來進行熒光的檢測,通過激發光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質標定的樣品上后,會發出波長更長的發射光,通過發射光柵后到達檢測器,熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例,熒光檢測靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣,但是容易受外界干擾,激發光與發射光容易互相影響,干擾檢測。
3.化學發光酶標儀:是來自生物化學反應中的自發光,可分為輝光型和閃光型兩種類型,輝光型發光持久,穩定,能持續一段時間;閃光型發光時間短,變化快,穩定性不強,需要應用自動加樣器才可以進行,化學發光中發出的光子數與樣品量呈一定比例關系,化學發光酶標儀靈敏度非常高,動力學范圍廣,
4.多功能酶標儀:是以上三種酶標儀的集合,它集成了兩種或者三種酶標儀于一體,可以同時進行光吸收,熒光和化學發光的檢測,功能強大,使用范圍廣,可作為研究平臺,避免了重復購買,是實驗室的值得擁有,另外根據通道的個數,可以將酶標儀分為單通道和多通道兩種類型,單通道又有自動和手動兩種之分。
酶標儀實際上是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同。光源燈發出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標本。該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號。電信號經前置放大,對數放大,模數轉換等信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算,[much]后由顯示器和打印機顯示結果。 微處理機還通過控制電路控制機械驅動機構X方向和Y方向的運動來移動微孔板,從而實現自動進樣檢測過程。
1.酶標儀在用單波長測定吸光度時,除受到測定內源性干擾( 包括噪音、漂移、電壓等) 因素外,受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中,由于液面表面張力的作用,液體的表面不是一個平面,而是形成一個凹面,從側面看似凹透鏡,這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響,光線在通過液面時,除正常的被液體吸收一部分外,尚有部分被折射和反射( 如光線通過凹透鏡那樣) ,影響吸光度的檢測。而酶標儀使用的又是通過光導纖維傳播的點光源,如果每次能在同一部位檢測,吸光度的重復性將得到保證,但由于機械運動等造成的誤差,不可能保證每孔都在相同部分被檢測,因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
2.在雙波長測定中,減少了測定干擾和電路干擾,因此測定結果明顯好轉。由于液體表面張力的不同,導致單波長測定時誤差較大。并且用不同的洗滌劑會影響到[much]后加入底物和終止液后的液面情況,用加入表面活性劑的洗滌劑清洗后,形成的液面更凹,對單波長檢測的影響更大,并且與表面活性劑的濃度成正比。而用中性蒸餾水洗滌后,單、雙波長檢測技術結果基本一致。
1.酶標儀應放置在低于40分貝的環境下。
2.為延緩光學部件的老化,應避免陽光直射。
3.操作時環境溫度應在15℃-40℃之間,環境濕度在15%-85%之間。
4.操作電壓應保持穩定。
5.操作環境空氣清潔,避免水汽,煙塵。
6.保持干燥、干凈、水平的工作臺面,以及足夠的操作空間。
1.開啟儀器電源開關,預熱5分鐘,同時啟動電腦。
2.啟動Magellan.exe程序,加入程序主界面,儀器微孔板架同時自動打開。
3.將待測微孔板在板架上放好。
4.根據不同的測量要求,設置好測定波長和測量模式后,進行檢測。
5.保存檢測結果或進行打印。
6.關閉計算機和主機電源,登記使用記錄。
1.洗板應清洗干凈,如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染。
2.如使用的樣品或試劑具有污染性,毒性和生物學危害,請嚴格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。
3.如儀器接觸過污染性或傳染性物品,記得進行清洗和消毒。
4.請勿將樣品或試劑酒到儀器表面或內部,操作完成后請洗手。
5.使用加液器,加液頭不能混用。
6.在測量過程中,請勿碰酶標板,以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。切記不要再測量過程中關閉電源。
7.對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差,應根據實際情況及時修改,以達到理想中效果。
8.使用完后記得蓋好防塵罩。
1.開機后無反應:電源未接通(應檢查電源線是否接好,保險絲是否燒斷)。
2.儀器無法與計算機通訊:連線不通。(首先檢查計算機與儀器接口是否正確,它應與儀器后部右側標有RS-232接口相連。因為打印機接口在其左下方可互插入,會造成接口錯誤發生。連線不通的另一種原因是連線本身的問題。另外還應檢查計算機設置的串口是否與儀器相連。
3.儀器顯示“濾光片錯誤”:儀器自檢過程中沒有接收到濾光片輪位置信號。應首先檢查濾光片輪是否正確放在濾光片輪的插槽內。注意濾光片輪在自檢過程中是否轉動。如不轉動,應拆下儀器左右側各一固定螺絲,將機蓋掀起,檢查濾光片輪驅動電機的連線是否插緊在電機控制電路板上(PCBMOTCU-03)。如果該輪連續轉不停止,則是檢測濾光片輪位置的槽形光耦損壞。在自檢過程中,濾光片輪正常轉動時應能聽到其轉動的聲音。轉動聲音是有間斷的,其間斷次數與裝有濾光片的個數相同。
4.打印機不打印:連接問題(檢查打印機與儀器的接口是否正確。檢查打印機的連線是否有問題,可用替換法試驗確定。有時是儀器與打印機接口電路板損壞,這時儀器往往顯示“缺紙”或“打印機故障”。)
5.關機后儀器存儲的日期和時間丟失:主電路板上的一鈕扣電池電壓過低所致(檢查:正常電池電壓為3VDC,如果低于2.6VDC便會出現上述問題)。
檢測技術:熒光強度、時間分辨熒光、熒光偏振、瞬時與連續發光、紫外-可見光吸收、FRET、TR-FRET、BRET、面積掃描、光譜掃描。
少見的光學系統:窄帶單色器、優化濾光片/二色鏡組合,再加上三個廣譜光源,令儀器在所有讀板模式下都能具有超卓的性能。
兼容Take3微量檢測板:兼容16道體積為2 µL的微量樣品的檢測,可進行低體積DNA/RNA 260nm檢測,節省寶貴試劑,快速簡單。
高敏感度:針對各種特定形態的專用光學元件令儀器小巧緊湊,可適用于更多檢測場合。
模塊化設計:可以僅購買所需功能。隨著實驗需求增加可輕松升級儀器。
高通量:針對篩選分析的[much]優化選擇,包括 1536 孔讀板模式。
酶標儀的光學系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個參比通道,每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何,均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和[accuracy]度等體現出來。光學系統好的話,則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
通常,酶標儀的吸光度測定范圍在0-2.5之間即可滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。
如Multiskan Ascent的吸光度測定范圍(Abs)達0-4.0,在0-4.0范圍,線性誤差不超過±2.0%,在0.3-3.0吸光度范圍內,測定精密度CV小于±0.2%;3.0-4.0 Abs范圍內,測定精密度CV小于士0.2%。因此,對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。
1.盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板,微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附作用,故用它作為固相載體,
2.由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標儀的光來都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。
3.酶標儀通常不僅用A,有時也使用光密度OD來表示吸光度,酶標儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動和手動2種之分,自動型的儀器。
1.酶標儀的操作應較簡單,菜單應用中文顯示。
2.儀器體積不宜過大,由于實驗室空間有限,因此小巧玲瓏、外形美觀的機型頗受用戶的青睞。
3.由于酶標儀在使用過程中,經常會有樣品液體外濺,所以酶標儀外殼要易于消毒、清潔。
4.對比色和打印的要求。一臺好的酶標儀應能夠快速進行比色和打印,可為檢測人員節省大量的時間,并可確保檢驗結果的[accuracy]性。
5.廠商可配置易損部件。酶標儀在臨床上使用頻率較高,一些部件的損壞率也較高,如放酶標儀的卡夾、滑槽等。廠商能及時地配置易置易損部件,對保證酶標儀正常運行和延長期壽命是非常重要的。